ADN polimerase Pfu

A ADN polimerase Pfu, também chamada Pfu DNA polimerase ou Pfu polimerase é uma ADN polimerase da arquea hipertermófila Pyrococcus furiosus. A sua função no microorganismo desta nucleotidiltransferase é a de replicar o seu ADN durante a divisão celular.

ADN polimerase Pfu
ADN polimerase Pfu
Estrutura da ADN polimerase de
Pyrococcus furiosus (PDB 2JGU)[1]
Indicadores
Número EC 2.7.7.7
Número CAS 9012902--
Bases de dados
IntEnz IntEnz
BRENDA BRENDA
ExPASy NiceZyme
KEGG KEGG
MetaCyc via metabólica
PRIAM PRIAM
Estruturas PDB RCSB PDB PDBe PDBj PDBsum
Gene Ontology AmiGO / EGO

A Pfu polimerase utiliza-se no laboratório para amplificar o ADN na reação em cadeia da polimerase (PCR), função para a qual apresenta várias vantagens em relação à enzima tradicionalmente usando Taq polimerase da bactéria termófilas Thermus aquaticus, uma vez que é termicamente mais estável e, acima de tudo, tem uma atividade exonuclease 3'-5' que permite eliminar os erros de inserção das bases durante a replicação (atividade de correcção de provas). Consequentemente, a PCR realizada com a Pfu polimerase é mais confiável do que a realizada com a Taq polimerase.

A Pfu polimerase disponível comercialmente gera uma taxa de erro de 1 por 1,3 milhões de pares de bases e pode produzir 2,6% de produtos mutados na PCR. Porém, é mais lenta que a Taq polimerase, uma vez que leva entre 1 a 2 minutos por ciclo para amplificar 1 kb de ADN a 72°C.

Historia

Os cientistas da empresa Stratagene, da Califórnia, descobriram as vantagens da Pfu em comparação com a Taq em 1991.[2] Obtiveram a patente 5.489.523 nos EUA sobre uma Pfu deficiente em actividade exonuclease e outra patente com o número 5.545.552 sobre a própria Pfu em 1996.

Referências
  1. Suhng Wook Kim, Dong-Uk Kim, Jin Kwang Kim, Lin-Woo Kang et Hyun-Soo Cho, « Crystal structure of Pfu, the high fidelity DNA polymerase from Pyrococcus furiosus », International Journal of Biological Macromolecules, vol. 42, no 4, 1er mai 2008, p. 356-361 DOI:10.1016/j.ijbiomac.2008.01.010. PMID 18355915
  2. Lundberg et al., "A High Fidelity Thermostable DNA Polymerase Isolated from Pyrococcus Furiosus," Strategies 4:34-35 (1991) e Gene 1991 Dec 12;108(1):1-6)
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